Leishmaniose Tegumentar Americana: uma análise histopatológica e molecular em lesões de dermatites no estado de Pernambuco, Brasil / American Cutaneous Leishmaniasis: a histopathological and molecular analysis of dermatitis lesions in the State of Pernambuco, Brazil

Objetivo: Realizar uma análise histopatológica e molecular em biópsia de pele entre as lesões de dermatites de pacientes com suspeita de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no hospital de referência do estado de Pernambuco entre o período de 2016 e 2017. Métodos: Trata-se de um estudo descritivo observacional, no qual todos os pacientes com lesões clinicamente sugestivas para LTA incluídos no estudo foram submetidos à coleta de biópsia de pele das lesões, as quais foram analisadas pela técnica histopatológica e PCR (Reação em Cadeia de Polimerase). Resultados: Foram analisadas 24 amostras de biópsia de pele de pacientes com suspeita clínica de LTA, por testes histopatológicos e confirmação pela PCR. As amostras foram caracterizadas pela busca do DNA de Leishmania braziliensis através da PCR. Das 24 amostras estudadas, em nenhuma foi encontrado DNA de L. braziliensis. Apenas em um caso foi detectada presença de amastigotas de Leishmania pela técnica histopatológica. Outros achados microscópicos observados foram: dermatite granulomatosa (33,33%), úlcera crônica (20,83%), carcinoma basocelular (16,66%), Leishmaniose, dermatite plasmocitária e inflamação granulomatosa (8,33%) e Hanseníase (4,16%). Conclusão: O diagnóstico histopatológico detectou um caso de LTA, porém, a PCR não encontrou DNA do parasito. A análise histopatológica mostrou que as lesões dermatotrópicas dos pacientes são oriundas principalmente de úlceras, tumores de pele e hanseníase.

Objective: Accomplish a histopathological and molecular analysis in skin biopsy between the dermatitis lesions of patients with suspected American Cutaneous Leishmaniasis (ATL) at the Hospital of Reference of the State of Pernambuco between the period of 2016 and 2017. Methods: This is a descriptive, observational study in which all patients with clinically suggestive lesions for ATL included in the study were submitted to skin biopsy of the lesions and analyzed by the histopathological technique and PCR (Polymerase Chain Reaction). Results: Were analyzed 24 skin biopsy samples from patients with clinical suspicion of ATL, by histopathological tests and confirmation by PCR. Samples were characterized by the search of Leishmania braziliensis DNA through PCR. Of the 24 samples studied, no DNA of L. braziliensis was found. Only in one case was detected presence of Leishmania amastigotes by histopathological technique. Other microscopic findings were granulomatous dermatitis (33.33%), chronic ulcer (20.83%), basal cell carcinoma (16.66%), Leishmaniasis, plasmacytoma dermatitis and granulomatous inflammation (8.33%) and leprosy, 16%). Conclusion: The histopathological diagnosis detected a case of ATL, however, the PCR did not find DNA of the parasite. The histopathological analysis showed that the dermatotropic lesions of the patients come mainly from ulcers, skin tumors and leprosy.

Prevalence and risk factors of syphilis and human immunodeficiency virus co-infection at a university hospital in Brazil

Abstract INTRODUCTION The incidence of syphilis has increased since the 1970s. METHODS This was a descriptive and analytical cross-sectional study with a non-probabilistic sample. RESULTS: Of 973 patients with human immunodeficiency virus, 179 (18.4%) tested positive for both human immunodeficiency virus and syphilis, 84.8% were men, 50.9% were aged between 36 and 50 years, 47.8% with syphilis were diagnosed with human immunodeficiency virus for 10-20 years, and 40.3% received antiretroviral therapy for 10-20 years. CONCLUSIONS The prevalence of syphilis in patients with human immunodeficiency virus is higher than expected, making it urgent to adopt efficient public health measures.

A comparison of four DNA extraction protocols for the analysis of urine from patients with visceral leishmaniasis

Introduction Polymerase chain reaction (PCR) may offer an alternative diagnostic option when clinical signs and symptoms suggest visceral leishmaniasis (VL) but microscopic scanning and serological tests provide negative results. PCR using urine is sensitive enough to diagnose human visceral leishmaniasis (VL). However, DNA quality is a crucial factor for successful amplification. Methods A comparative performance evaluation of DNA extraction methods from the urine of patients with VL using two commercially available extraction kits and two phenol-chloroform protocols was conducted to determine which method produces the highest quality DNA suitable for PCR amplification, as well as the most sensitive, fast and inexpensive method. All commercially available kits were able to shorten the duration of DNA extraction. Results With regard to detection limits, both phenol: chloroform extraction and the QIAamp DNA Mini Kit provided good results (0.1 pg of DNA) for the extraction of DNA from a parasite smaller than Leishmania (Leishmania) infantum (< 100fg of DNA). However, among 11 urine samples from subjects with VL, better performance was achieved with the phenol:chloroform method (8/11) relative to the QIAamp DNA Mini Kit (4/11), with a greater number of positive samples detected at a lower cost using PCR. Conclusion Our results demonstrate that phenol:chloroform with an ethanol precipitation prior to extraction is the most efficient method in terms of yield and cost, using urine as a non-invasive source of DNA and providing an alternative diagnostic method at a low cost. .

Candida famata-induced fulminating cholecystitis

Lithiasic cholecystitis is classically associated with the presence of enterobacteria, such as Escherichia coli, Enterococcus, Klebsiella, and Enterobacter, in the gallbladder. Cholecystitis associated with fungal infections is a rare event related to underlying conditions such as diabetes mellitus, steroid use, and broad-spectrum antibiotic use for prolonged periods, as well as pancreatitis and surgery of the digestive tract. Here, we present the first reported case of a gallbladder infection caused by Candida famata.

Casos autoctones de esquistossomose mansonica em criancas de Recife, PE / Casos autoctonos de esquistosomiasis mansonica en ninos de Recife, PE, Brasil / Autochthonous cases of schistosomiasis in children in Recife, Northeastern Brazil

OBJETIVO : Investigar criadouros com moluscos hospedeiros e casos humanos autóctones para esquistossomose. MÉTODOS : Entre julho de 2010 e setembro de 2012 foram realizados: (1) levantamento malacológico para busca ativa de criadouros, coleta e identificação de caramujos Biomphalaria positivos para Schistosoma mansoni em Recife, PE; (2) inquérito de prevalência com 2.718 escolares, de sete a 14 anos, para diagnóstico de casos de esquistossomose; (3) exame clínico e ultrassonografia nos casos positivos para S. mansoni. Os casos foram investigados quanto à sua autoctonia e avaliados clinicamente. Os casos e criadouros foram georreferenciados e espacializados. RESULTADOS : Foram identificados 30 criadouros de B. straminea , quatro deles potenciais focos de transmissão, uma vez que os testes moleculares identificaram DNA de S. mansoni nos caramujos coletados. Foram diagnosticadas 14 crianças com esquistossomose; entre elas, cinco foram consideradas casos autóctones da doença. CONCLUSÕES : Ações emergenciais pela vigilância em saúde são necessárias para evitar que a esquistossomose se endemize em Recife, como acontece em localidades litorâneas do estado de Pernambuco. .

OBJETIVO Investigar criaderos con moluscos hospedadores y casos humanos autóctonos para esquistosomiasis. MÉTODOS Se ejecutaron: estudio malacológico para búsqueda activa de criaderos, colecta e identificación de caracoles Biomphalaria positivos para S. mansoni en Recife, PE, entre julio de 2010 y septiembre de 2012, pesquisa de prevalencia con 2.718 escolares, de siete a 14 años, para diagnóstico de casos de esquistosomiasis, examen clínico y de ultrason en los casos positivos para S. mansoni. Los casos fueron investigados con respecto a su autoctonía y evaluados clínicamente. Los casos y criaderos fueron geo-referenciados y espacializados. RESULTADOS Se identificaron 30 criaderos de B. straminea, cuatro de ellos potenciales focos de transmisión, luego que las pruebas moleculares identificaron DNA de S. mansoni en los caracoles colectados. Se diagnosticaron 14 niños con esquistosomiasis, entre ellas cinco fueron considerados casos autóctonos de la enfermedad. CONCLUSIONES Acciones de emergencia para vigilancia de salud son necesarias para evitar que la esquistosomiasis se vuelva endémica en Recife como sucede en localidades del litoral de Pernambuco. .

OBJECTIVE : Investigate breeding sites with host snails and autochthonous human cases of schistosomiasis. METHODS : Between July 2010 and September 2012 were performed: (1) malacological survey searching for breeding sites, collection and identification of Biomphalaria snails positive for Schistosoma mansoni in Recife, PE, Northeastern Brazil; (2) prevalence survey in 2,718 schoolchildren aged from seven to 14 years old to identify cases of schistosomiasis, clinical examination and ultrasound in positive cases of S. mansoni. The autochthony of the cases was investigated and the case were clinically evaluated. The cases and breeding sites were georeferenced and spatially described. RESULTS : The results identified 30 breeding with B. straminea, four of which were potential foci of transmission, as molecular testing identified snails with S. mansoni DNA. There were 14 children diagnosed with schistosomiasis, of which five were considered to be autochthonous cases of the disease. CONCLUSIONS : Urgent measures are required in order to avoid schistosomiasis becoming endemic to Recife, as has happened in other coastal areas of the state of Pernambuco. .

Phenotypic methods for determination of methicillin resistance in Staphylococcus spp. from health care workers / Métodos fenotípicos para determinação da resistência à meticilina em Staphylococcus spp. de profissionais de saúde

INTRODUCTION: Staphylococcus spp. is an important healthcare-associated pathogen and the identification of methicillin-resistant strains in samples of colonization may provide data to assist in the antimicrobial therapy success. OBJECTIVES: To determine the occurrence of colonization by methicillin-resistant Staphylococcus spp. (MRS), through the detection of the mecA gene and to evaluate different phenotypic methods for the presumptive detection of methicillin resistance in samples of the anterior nasal cavity and hands of the health care personnel of a university hospital in the state of Pernambuco, Brazil. METHODS: We selected the 28 isolates of Staphylococcus spp., which showed an intermediate or resistant phenotypic profile for oxacillin, detected by the Kirby Bauer technique. The methods used were disk-diffusion tests for cefoxitin, minimal inhibitory concentration by E-test for oxacillin, screening for oxacillin resistance and mecA gene detection by polymerase chain reaction (PCR). RESULTS: About the phenotypic methods utilized, only the E-test of oxacillin did not show a statistically significant difference in relation to PCR for the mecA gene detection, considered the gold standard. CONCLUSION: The E-test of oxacillin was the best of the phenotypic methods utilized. It is necessary to correctly detect MRS in healthy individuals, because they can act as carriers and can therefore be a potential source of microorganisms involved in hospital infections.

INTRODUÇÃO: Staphylococcus spp. é um importante patógeno associado aos cuidados em saúde, e a identificação de isolados resistentes à meticilina em amostras de colonização pode fornecer dados para auxiliar no sucesso da terapia antimicrobiana. OBJETIVOS: Determinar a ocorrência de colonização por Staphylococcus spp. resistentes à meticilina (MRS) por meio da detecção do gene mecA e avaliar diferentes métodos fenotípicos para a detecção presuntiva da resistência à meticilina em amostras da cavidade nasal anterior e das mãos de profissionais de saúde de um hospital universitário no Estado de Pernambuco, Brasil. MÉTODOS: Foram selecionados 28 isolados de Staphylococcus spp. que mostraram perfil intermediário ou resistente à oxacilina, detectado pela técnica de Kirby Bauer. Os métodos utilizados foram o teste de disco difusão de cefoxitina, concentração inibitória mínima pelo E-test de oxacilina, screening para avaliação da resistência à oxacilina e reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção do gene mecA. RESULTADOS: Dos métodos fenotípicos utilizados, apenas o E-test de oxacilina não mostrou diferença estatística significante em relação à PCR para a detecção do gene mecA, considerado o método padrão-ouro. CONCLUSÃO: O E-test de oxacilina foi o melhor método fenotípico utilizado. É necessário detectar corretamente o MRS em indivíduos saudáveis, pois eles podem atuar como portadores, sendo uma fonte potencial de microrganismos envolvidos em infecções hospitalares.

Colonização pelo Staphylococcus aureus em profissionais de enfermagem de um hospital escola de Pernambuco / Colonization by Staphylococcus aureus among the nursing staff of a teaching hospital in Pernambuco / Colonización por Staphylococcus aureus en profesionales de enfermería de un hospital escuela de Pernambuco

O presente estudo foi realizado com o objetivo de identificar a prevalência de colonização pelo Staphylococcus aureus em profissionais de enfermagem de um hospital universitário de Pernambuco, bem como avaliar o perfil de resistência deles isoladamente. Para isso, foi realizado um estudo transversal, no qual foram coletadas amostras biológicas das mãos e da cavidade nasal. A identificação do S. aureus foi realizada por meio do semeio em agar-sangue, agar manitol-salgado e através dos testes de catalase e coagulase. O perfil de sensibilidade foi determinado pela técnica de Kirby Bauer e para determinação da resistência à meticilina foi realizado o screening em placa com oxacilina com adição de 4% de NaCl. Dos 151 profissionais avaliados, 39 se encontravam colonizados, o que demonstrou uma prevalência de 25,8%. Dentre as variáveis estudadas, a faixa etária e a quantidade de EPI apresentaram-se associadas à colonização pelo microrganismo. De todas as linhagens isoladas, apenas cinco apresentaram resistência à meticilina.

This study was performed with the objective to identify the prevalence of colonization by Staphylococcus aureus in nursing professionals from a teaching hospital in Pernambuco, and evaluate the resistance profile of these isolates. To do this, we performed a cross-sectional study where biological samples were collected from the hands and nasal cavities of the subjects. S. aureus was identified using agar (blood agar and mannitol salt) via catalase and coagulase tests. The sensitivity profile was determined by Kirby Bauer technique and determination of methicillin resistance was performed with oxacillin screening with sodium chloride (NaCl) addition. Of the 151 professionals evaluated, 39 were colonized which showed a prevalence of 25.8%. Among the variables studied, age and use of PPE were associated with colonization by the organism. Of all the isolates, only five were resistant to methicillin.

Estudio realizado para identificar prevalencia de colonización por Staphylococcus aureus en profesionales de enfermería de hospital universitario de Pernambuco, así como evaluar el perfil de resistencia de la bacteria aislada. Se realizó un estudio transversal en el que se recolectaron muestras biológicas de manos y cavidad nasal. La identificación del S. aureus se realizó mediante cultivo en agar-sangre, agar-manitol salado y mediante pruebas de catalasa y coagulasa. El perfil de sensibilidad se determinó por técnica de Kirby Bauer y para la determinación de resistencia a meticilina se realizó screening en placa con oxalacina, con adición de 4% de NaCl. De 150 profesionales evaluados, 39 estaban colonizados, lo que demostró prevalencia de 25,8%. Entre las variables estudiadas, faja etaria y cantidad de EPI se presentaron asociadas con la colonización por la bacteria. De todas las cepas aisladas, apenas cinco presentaron resistencia a meticilina.

Correlation of biological serum markers with the degree of hepatic fibrosis and necroinflammatory activity in hepatitis C and schistosomiasis patients

Liver biopsy is the gold-standard method to stage fibrosis; however, it is an invasive procedure and is potentially dangerous. The main objective of this study was to evaluate biological markers, such as cytokines IL-13, IFN-ã, TNF-á and TGF-â, platelets, bilirubins (Bil), alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), total proteins, ã-glutamil transferase (ã-GT) and alkaline phosphatase (AP), that could be used to predict the severity of hepatic fibrosis in schistosomiasis and hepatitis C (HC) as isolated diseases or co-infections. The following patient groups were selected: HC (n = 39), HC/hepatosplenic schistosomiasis (HSS) (n = 19), HSS (n = 22) and a control group (n = 13). ANOVA and ROC curves were used for statistical analysis. P < 0.05 was considered significant. With HC patients we showed that TNF-á (p = 0.020) and AP (p = 0.005) could differentiate mild and severe fibrosis. With regard to necroinflammatory activity, AST (p = 0.002), ã-GT (p = 0.034) and AP (p = 0.001) were the best markers to differentiate mild and severe activity. In HC + HSS patients, total Bil (p = 0.008) was capable of differentiating between mild and severe fibrosis. In conclusion, our study was able to suggest biological markers that are non-invasive candidates to evaluate fibrosis and necroinflammatory activity in HC and HC + HSS.

Epidemiological surveillance and susceptibility of Staphylococcus aureus among healthcare workers at a reference hospital: preliminary assessment / Vigilância epidemiológica e susceptibilidade de Staphylococcus aureus em profissionais de saúde de um hospital de referência: uma avaliação inicial

Healthcare professionals (HCPs) are liable to pathogenic microorganisms infection/colonization, which plays an important role as a potential source of transmission to patients, coworkers, relatives and communities.The present study evaluates the prevalence of Staphylococcus aureus colonization in HCPs who work at are ference hospital in Recife, PE, and the isolates profiles of susceptibility to antimicrobial drugs. A crosssectional study was undertaken, and HCPs from operating rooms, intensive care units (ICUs), hemodialysis and nephrology units of the Clinical Hospital of Pernambuco were evaluated. S. aureus isolates wereidentified by standard methods recommended by CLSI and the susceptibility to methicillin and vancomycin was determined by the minimum inhibitory concentration technique (E-test). The prevalence of S aureus observed among HCPs was 25.7%. Among S. aureus strains isolates, the highest percentage of antibioticresistance was observed in penicillin (91.4%), erythromycin (43.1%) and cefoxitin (17.2%). All of the strainswere sensitive to vancomycin. Three S. aureus methicillin-resistant (MRSA) strains were identified, whichwere isolated from the nursing aides staff. The prevalence of MRSA found in the present study was lowerthan those reported elsewhere. These findings suggest that a continuous assessment should be performedfor better understanding the dynamics of S. aureus colonization/infection in order to reduce the risks of infection by this microorganism.

Infecção/colonização por microrganismos patogênicos em profissionais de saúde (PS) representa uma potencial fonte de transmissão para os pacientes, colegas de trabalho, familiares e comunidade. No presente estudo foi avaliada a prevalência da colonização por Staphylococcus aureus em PS de um hospital de referência do Recife, no período de março e julho de 2007, e o perfil de susceptibilidade das cepas isoladas às drogas antimicrobianas. Foi realizado um estudo transversal, no qual os PS de salas cirúrgicas, unidades de terapiaintensiva (UTIs), hemodiálise e unidades de nefrologia foram avaliados. O isolamento e a identificação de S. aureus foram efetuados de acordo com as orientações do CLSI. O perfil de susceptibilidade da bactéria aos antimicrobianos meticilina e vancomicina foi determinado por meio de técnica de difusão em discoassociada à técnica de concentração inibitória mínima (E-test). A prevalência de colonização por S. aureus entre os PS foi de 25,7%. Entre as cepas isoladas de S. aureus, os maiores percentuais de resistência foram observados frente à penicilina (91,4%), eritromicina (43,1%) e cefoxitina (17,2%). Todos os isolados foram sensíveis à vancomicina. Três cepas foram identificadas como resistentes à meticilina, as quais foram isoladas de auxiliares de enfermagem. Sugere-se que avaliações contínuas sejam realizadas para melhor compreensão da dinâmica de colonização/infecção e redução dos riscos de infecção por esse microrganismo.

Diferenciação de micobactérias por PCR multiplex / Differentiation of micobacteria by multiplex PCR

O trabalho visou à otimização de um método baseado na reação em cadeia da polimerase multiplex - para diferenciação de micobactérias de interesse para a saúde pública. A PCR Multiplex baseou-se na amplificação simultânea do genehsp65, presente em todo gênero Mycobacterium, do gene dnaJ, presente apenas em Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium e da sequência de inserção IS6110 presente no complexo Mycobacterium tuberculosis, gerando amplicons de 165pb, 365pb e 541pb, respectivamente. O limite de detecção foi de 1fg para o alvo hsp65, 100pg para o dnaJ e 0,1fg para o IS6110. A PCR multiplex detectou até 100pg de DNA de Mycobacterium tuberculosis. O sistema demonstrou ser específico e sensível na detecção de Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium e Mycobacterium smegmatis. Os resultados obtidos utilizando cepas de referência demonstraram que a PCR multiplex pode ser uma ferramenta rápida, sensível e específica na diferenciação de micobactérias.

This study aimed to optimize a method based on the polymerase chain reaction - multiplex PCR - for differentiation of mycobacteria species of interest for public health. The multiplex PCR was based on simultaneous amplification of the hsp65 gene, which is present in all species of the Mycobacterium genus, the dnaJ gene, which is present only in Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium and the IS6110 insertion sequence, which is present in the Mycobacterium tuberculosis complex, generating amplicons of 165 bp, 365 bp and 541 bp, respectively. The detection limit was 1 fg for the hsp65 target, 100 pg for dnaJ and 0.1 fg for IS6110. The multiplex PCR detected down to 100 pg of DNA of Mycobacterium tuberculosis. The system was shown to be specific and sensitive for detection of Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium and Mycobacterium smegmatis. The results obtained using reference strains of mycobacteria showed that multiplex PCR may be a fast, sensitive and specific tool for differentiation of mycobacteria.

Coleções biológicas do Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães da Fundação Oswaldo Cruz: análise de um workshop / Biological collections from Aggeu Magalhães Research Center, Oswaldo Cruz Foundation: analysis of a workshop

Sob os auspícios da Vice-Diretoria de Pesquisas, Desenvolvimento Tecnológico e Serviços de Referência do Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães (CPqAM) da Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz), foi realizado em 18 de fevereiro de 2009 o I Encontro de Curadores de Coleções Biológicas do CPqAM, tendo como objetivos discutir a legislação aplicada às atividades de coleções biológicas e uniformizar os procedimentos adotados para o gerenciamento e garantia da quantidade dos acervos. No encontro foram apresentadas as quatro relações mantidas no CPqAM, reconhecidas pelo Fórum Permanente de Coleções Biológicas da Fiocruz: Coleções de Bactérias (Coleção de Culturas de Yersinia spp e Coleção de Bactérias NB2); Coleção de Vírus (Banco de Vírus do LaVITE) e Coleção Helmintológica (Laboratório de Esquistossomose). Foram tratados com destaque os aspectos de biossegurança e de biosseguridade. Constatou-se a necessidade de serem aplicados esforços no sentido de solucionar algumas inconformidades relativas a infraestrutura física, disponibilidade de recursos humanos e padronização da documentação, além da informatização dos dados do acervo do CPqAM.

Prevalence and risk factors for Staphylococcus aureus in health care workers at a University Hospital of Recife-PE

Staphylococcus aureus is the main human pathogen that colonizes individuals in general population. The objective of the study was evaluate the epidemiological and sensitivity profile of S. aureus lineage, isolated in health care workers (HCW) of a University Hospital in Pernambuco state, Brazil. Biological samples of hands and nasal cavities were sown in agar sheep blood. Colonies under suspicion of being S. aureus were identified using Gram staining, catalase test and coagulase, mannitol-salty agar fermentation and DNAse agar. The resistance to mupirocin was analyzed through the Kirby Bauer technique. In relation to methicillin and vancomycin the determination was by the minimum inhibitory concentration method (E-test). From the 202 HCW evaluated, 52 were colonized by S. aureus (25,7 percent). The factors associated to the colonization by S. aureus were: age-group, professional category, use of individual protection equipments (frequency and numbers). All S. aureus isolate lineages were sensitive to mupirocin and vancomycin, and three of them were identified as methicillin-resistant. The prevalence of MSSA and MRSA among HCW was considered low and was below the results described in the literature. The isolate S. aureus lineages have shown low resistance profile.

Staphylococcus aureus: aspectos biológicos e patogênicos / Staphylococcus aureus: biological and pathogenic aspects

Na atualidade o gênero Staphylococcus abrange aproximadamente 42 espécies, sendo que destas, 20 são de interesse médico e veterinário, uma vez que, estão associadas a uma variedade de infecções oportunistas em seres humanos e animais. Dentre essas espécies causadoras de enfermidades, o Staphylococcus aureus requer especial atenção devido a seu alto potencial patogênico e também a sua capacidade de desenvolver resistência aos antimicrobianos utilizados rotineiramente na prática clínica, estando desta forma, associado a um amplo espectro de doenças que variam desde lesões cutâneas superficiais até infecções sistêmicas graves.

Desenvolvimento de métodos moleculares baseados em PCR para a detecção de Schistosoma mansoni / Development of PCR-based molecular methods for the detection of Schistosoma mansoni

Os primers que apresentam como alvo o gene que codifica o rDNA de SSU foram projetados para amplificar com elevada especificidade DNA de Schistossoma mansoni. Cinco sistemas de PCR foram desenvolvidos: PCR convencional, nested-PCR (NPCR) convencional, single tube nested PCR (STNPCR), hemi-nested PCR (HNPCR) convencional, e single tube hemi-nested PCR (STHNPCR). A nested-PCR é o modelo mais sensível de PCR. Entretanto, o risco da contaminação é muito alto, já que é necessário ajustar a reação em dois tubos diferentes. O objeto principal deste trabalho é o desenvolvimento de um sistema de STNPCR (patente depositada), visando diminuir o risco de contaminação cruzada, embora mantendo a sensibilidade elevada. O sistema de STNPCR compreendeu 60 ciclos em que concentrações limitadas de “primers” externos participam da PCR sem competir com os primers internos durante os primeiros 15 ciclos da reação, e os primers internos (imobilizados na face interna da tampa do microtubo) fossem introduzidos no sistema de PCR no décimo sexto ciclo por inversão do microtubo. As concentrações dos outros componentes da reação seriam as mesmas usadas em reações padrão de PCR. A avaliação do limite de detecção das PCRs foi realizada utilizando-se quantidades conhecidas de DNA genômico de S. mansoni, que variou de 10 ng a 0,001 fg. O limiar de detecção da PCR simples foi de 10 pg enquanto, a quantidade mínima detectada pelas PCRs nested convencional e STNPCR foram de 0,1 fg e 1 fg de DNA, respectivamente. Por sua vez o limite de detecção da HNPCR convencional também foi de 0,1 fg, e o da STHNPCR foi de 10 fg. Os sistemas desenvolvidos foram testados em pools de caramujos sadios e infectados com S. mansoni, apresentando resultados bastante satisfatórios em relação à especificidade e sensibilidade. A detecção rápida e precisa da infecção do caramujo pelo S. mansoni é de grande importância para o controle da transmissão da esquistossomose, Diante das dificuldades para se realizar esse diagnóstico pelos métodos convencionais. Sendo assim, o presente estudo buscou avaliar a utilidade das abordagens moleculares para identificar focosx de transmissão da esquistossomose por meio da detecção do S. mansoni emm pools de caramujos vetores.